问答题
一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母 DNA 连接后转化对两种抗生素都敏感的 E.coli 菌株。 (1)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞? (2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆?
(1)选择Ampr的转化子; (2)所需的克隆是Ampr和Kanr。任何能够抗这两种药物的克隆都是自连的非重组质粒。
问答题 插入失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
问答题 切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
问答题 你在做Southern 印迹分析,并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案,下面一步骤是用 NaOH溶液浸泡凝胶,使 DNA变性为单链。为了节省时间,你略过了这一步,直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交,最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?